一起寻找外泌体的“踪迹”

   最近科研界什么比较流行？？
？外泌体（Exosomes）是当之无愧的热点话题
。。。不论在肿瘤领域
、
、神经科学领域还是代谢领域
，，都有大量的外泌体相关文章发表，，
，以探究外泌体的功能和机制。。。。
   再梳理一下外泌体的基本知识。。。外泌体是一类大小为30-150nm
、
、、、呈茶托状的由脂质双层膜包裹的细胞外囊泡，，广泛存在于细胞培养上清及各种体液中，，，，包括血液、、淋巴液、、
、唾液、、、尿液、、卵泡液、、、精液、、心包液、
、
、
、乳汁等。。外泌体内含有多种蛋白质（如TSG101
、、
、、HSP70等）、、核酸（DNA、、RNA）和脂质（胆固醇、、、鞘磷脂等），，
，这些内容物因释放外泌体的细胞不同而有比较大的差异。。
。
   外泌体首先需要从样本中分离出来，，，，目前比较公认的分离方法是超速离心法
，，，，再通过透射电镜（TEM）
、、、、纳米粒径跟踪分析（NTA）、、Western Blot等进行鉴定。。
。获得外泌体后，
，，，对外泌体进行标记，，，，观察外泌体被摄取情况
，
，
，，再进一步探索外泌体的功能，
，，如组织修复、、肿瘤转移
、、代谢重建等
。。。。下面我们仔细聊一聊外泌体标记的方法：

一、
、、、亲脂性染料标记：
目前已发表的外泌体文章中，，，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，，，
，体内和体外都较多应用。。亲脂性染料主要分为两大类，，，一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），，由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，，，所以染色效果较好，，
，，应用较广泛。。
。    二类是Di系列的亲脂性染料
，，包括DiI（橙色荧光）、、DiO（绿色荧光）
、、、DiD（红色荧光）、
、、DiR（深红色荧光）。
。。。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，，，，在活体成像中用来示踪。。。。
二、、慢病毒介导CD63-GFP表达：
   将外泌体的特定蛋白CD63和绿色荧光蛋白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中
，，随后用此慢病毒感染细胞
，，使细胞分泌的外泌体带有绿色荧光。。
三、、用金纳米颗粒（gold nanoparticles，，GNPs）标记：
   将金颗粒标记的外泌体通过鼻内给药不仅能进行无创跟踪
，，而且能促进外泌体在脑部的积累和延长在病变区域的存在时间，，增强体内神经成像的效果。。因此，，，，这种外泌体标记技术可以作为多种脑疾病的强大诊断工具
，，，并可能增强基于外泌体的神经恢复治疗。。。
四、、用近红外（NIR）荧光探针进行标记：
   这是一种使用两亲性探针对NIR荧光标记的外泌体进行内源性检测的方法，，无需对外泌体进行免疫标记或合成或色谱处理。。由于NIR波长的荧光探针能穿透体内组织，
，，，从而提供了从细胞直接转换到体内使用的好处。。
五、、用Gaussia luciferase（gluc）和截断的lactadherin进行标记：
   将gLuc-lactadherin构成融合表达的质粒，，再将此质粒转染细胞，，使细胞分泌的外泌体带有强的萤光素酶活性。。。。将标记的外泌体进行静脉注射入小鼠体内，，
，，看外泌体在组织的分布情况。。。 文章总结：
外泌体标记对探究外泌体的功能是必不可少的一个步骤，，首先需要观察到外泌体被受体细胞吸收或到达目的组织
、、、、器官，，，，再检测受体细胞、、、组织或器官中相应指标的变化
，，
，
，看外泌体是否具有一定的功能。。。。确定外泌体具有功能后，
，再通过高通量测序或基因芯片进行差异表达分子的挖掘，，
，，进一步深入研究机制。。
。。